Аллергия     |     Антитела к иммунным комплексам с аллергеном из пыльцы растений

Гемагглютинирующие антитела

Под гомагглютинирующими антителами подразумевают антитела сыворотки крови, способные специфически агглютинировать эритроциты, соединенные с аллергеном.

Вопрос о том, являются ли гемагглютииины особым видом антител или же способность специфически агглютинировать эритроциты — одно из свойств других типов аллергических антител (реагинов, блокирующих), остается нерешенным.

Имеются данные о том, что гемагглютинирующие антитела могут отражать уровень как реагинов, так и блокирующих антител, но больше последних (Sehnon, Guenes, Kisil, 1967).

Основные свойства трех важнейших типов аллергических антител приведены в табл. 32.

Методы определения реагинов

Начало всестороннему изучению реагинов положил классический эксперимент Праустшща. Недостатком этого основного метода определения реагинов является необходимость постановки реакции на реципиенте-волонтере и опасность переноса с сывороткой крови вируса гепатита. Удачная идея использовать в качестве реципиентов обезьян привела к появлению теста на животных (Layton, 1966). Как уже говорилось выше, реагины не выявляются обычными иммунологическими реакциями. Причиной этого некоторые исследователи считают моиовалеитность реагшшых антител. Но более распространенными являются представления о реагинах как о полных антителах, присутствующих в сыворотке крови в столь малой концентрации, что они по определяются общепринятыми в иммунологии методами in vilro. Путем сочетания иммунохимических методов исследования с радиоактивной меткой было показано, что реагины содержатся в сыворотке крови аллергического больного в количестве 0,15— 0,1 мкг/мл (К. Ishizaka, T. Ishizaka, 1966). Это в 5000 раз меньше пороговой концентрации, которую можно обнаружить при помощи оптической системы, применяемой при аналитическом ультрацентрифугировапии, и в 10—100 раз ниже предела определения белков методом преципитации специфической антисывороткой в геле.

Поиски теста для определения реагинов in vitro велись в разных направлениях.

Предложенный Ridges и Augustin (1964) тест агглютинации лейкоцитов (double layer leucocyte agglutination) заключается в следующем. Хорошо отмытые лейкоциты больного аллергией (спонтанная сенсибилизация или лейкоциты иеаллергического донора после инкубации с сывороткой крови больного поллипозом (пассивная сенсибилизация) приводят в контакт с аллергеном. На этом этапе агглютинации не наблюдается. Она наступает после добавления к реакционной смеси в качестве индикатора гетерологпчпой преципитирующей сыворотки против данного аллергена. Тест несколько громоздок, требует многократного отмывания лейкоцитов (18 раз), и пока не имеется данных о перспективах его практического использования.

Hoigne, Grossman и Storck (1955) разработали серологическую реакцию, основанную на выявлении чувствительным нефелометром минимального, по улавливаемого визуально помутнения аллергической сыворотки при добавлении специфического аллергена. Однако положительные результаты получаются только в случае резко выраженных симптомов лекарственной аллергии.

Другим интересным направлением исследований по разработке теста для определения реагинов являются работы по измерению основного продукта деструкции клеток — гистамина. Было показано, что при инкубации специфического аллергена с целой кровью или с отмытыми лейкоцитами атонических больных происходит освобождение гистамипа из лейкоцитов. Реакция носит строго специфический характер и может быть воспроизведена при пассивной сенсибилизации лейкоцитов иеаллергического донора сывороткой крови больных ноллииозом. Исходя из этого Osier, Lichtenstein и Levy (1965) предложили in vitro модель реакции Праусиитца — Кюстпера. Авторы отмечают высокую чувствительность .этой реакции, однако только лейкоциты 16—20% доноров удается пассивно сенсибилизировать.

В 1962 г. Shelley показал возможность определения повышенной чувствительности при ряде аллергических заболеваний путем использования метода деграиуляции базофилов. А. А. Польнер (1968) в нашей лаборатории этим методом определял повышенную чувствительность у больных поллинозом. Он показал, что достоверны только четко положительные результаты.

Для диагностики клинической аллергии у больных и индуцированной повышенной чувствительности у экспериментальных животных используются методы прямой и непрямой деграиуляции тучных клеток. Принцип реакции такой же, как в тесте Шелли, за исключением того, что объектом, подвергающимся разрушению, являются не базофилы кролика, а тучные клетки крыс.

Schwartz и Vardinon (1966) показали, что деструкция тучных клеток сенсибилизированного животного в присутствии специфического антигена подавляется при добавлении в реакционную смесь специфических антител,

Vardinon, Levanon и Schwartz (1967) использовали метод торможения деструкции тучных клеток для диагностики повышенной чувствительности у больных аллергией. Крыс сенсибилизировали различными видами аллергенов. Перитонеальиые тучные клетки, взятые у сенсибилизированных животных, разрушались в присутствии специфического аллергена. Добавление сыворотки больных, чувствительных к тому же аллергену, тормозило реакцию. Авторы отмечают высокую специфичность данного теста и указывают на преимущество его перед непрямым методом деграиуляции тучных клеток, так как он позволяет количественно (по титру сыворотки, вызывающей торможение) определять концентрацию специфических антител в исследуемой сыворотке.

В 1956 г. Black предложил диагностический тест, заключающийся в демонстрации цитотоксического эффекта аллергена в присутствии специфических антител. Живые полиморфно-ядерные нейтрофилы инкубировали с исследуемой сывороткой атопического больного и специфическим аллергеном. Если у больного имелась повышенная чувствительность к данному аллергепу, наступали неподвижность и лизис лейкоцитов. В контрольном препарате наблюдалось амебоидное движение клеток.

Альтерацию лейкоцитов человека при воздействии аллергена и специфических аптител наблюдали также Н. В. Медуницъш, В. Б. Гервазие-ва (1967) и С. М. Титова (1967).

Лимфоциты крови атомических больных, культивируемые в присутствии специфического аллергена, к которому у больных имеется повышенная чувствительность, трансформируются в бласты. Однако реакция трансформации лимфоцитов, являясь чрезвычайно интересным научным фактом, не позволяет идентифицировать антитела, вызывающие бласто-генез (Chalmers et al., 1966, и др.).

Другой метод определения специфической чувствительности больного с использованием циркулирующих аптител был предложен Gruchaud и Frei (1967). Танизированпые эритроциты барана обрабатывают аллергеном, к которому у больного предполагают повышенную чувствительность, и инкубируют с лимфоцитами, выделенными из периферической крови больного. При этом происходит иммунное прилипание эритроцитов к лимфоцитам, обусловленное, по мнению авторов, наличием па лимфоцитах специфических антител. Исследования, проведенные с использованном этой методики, еще недостаточны. По-видимому, этим методом определяется аллергенсвязывающая активность сыворотки; связь его с реагинной активностью не ясна.

В 1962 г. Lidd и Farr предложили метод количественного измерения антигеисвязывающей активности атонической сыворотки путем использования радиоактивного йода. Однако Hale с соавт. (1967), указывая па способность сыворотки крови атонических больных в противоположность сыворотке здоровых лиц связывать специфический антиген, пе отмечают корреляции между антигеисвязывающей и кожно-сенсибилизирующей активностью сыворотки.

Millman и соавт. (1964), Yamate и Evaland (1967) измеряли степень флюоресценции элементов белой крови после реакции с нерастворимым преципитатом аллергена (меченного флюоресцеином или с помощью прямого метода Кунса). Однако возникает опасение, возможно ли визуально дифференцировать специфическое свечение, поскольку лейкоциты обладают способностью флюоресцировать при поглощении красителя.

В табл. 33 приведены основные методы определения аллергических антител человека при реакциях немедленного типа.

В настоящее время получил распространение радиоаллергосорбептпый тест (PACT), разработанный Wide, Bennich и Iohansson (1967).

Сущность метода заключается в том, что аллерген, связаппый с твердым полимером, реагирует со специфическим для этого аллергена IgE сыворотки крови больного. Затем к полученному комплексу аллерген IgE добавляют меченный изотопом анти-IgE. Полученный радиоактивный комплекс полимер-аллерген IgE-анти IgE (схема 9) промывают. Связанная радиоактивность на частицах измеряется на гамма-счетчике. Величина радиоактивности эквивалентна количеству специфических IgE-антител в исследуемой пробе. Чем выше радиоактивность полученпого комплекса,

тем, следовательно, больше реагинов присоединилось к данному аллергену из исследуемой сыворотки. Чем больше реагинов фиксировано на полимере, тем больше будет на нем фиксировано меченного Na 125I аптиглобу-лина и тем, следовательно, больше реагина присоединится к данному аллергену из сыворотки крови больного. Количество фиксированного ап-тиглобулина регистрируется на счетчике и выражается в импульсах в минуту. Эта реакция коррелирует с реакцией Прауснитца — Кюстпора и провокационной пробой со специфическим аллергеном.

В основе метода PACT лежит аитиглобулииовый тест Кумбса, который в несколько измененном виде был применен и для определения реагипов (рис. 32). Метод называется реакцией отклонения антигена и аптиглобу-лина на эритроцит. Принципиальная схема обоих методов показана в табл. 34,

В НИАЛ АМН СССР впервые в СССР в 1972 г. для определения общего и аллергеиспецифического IgE были отработаны и внедрены в

практику метод радиальной радиоиммуподиффузии и упрощенный вариант радиоаллергосорбеытного метода (PACT) для диагностики аллергических заболеваний (В. И. Шустова). В лабораторной практике этот метод определения реагинной активности является удобным и более количественным, чем кожное тестирование или реакция пассивного переноса повышенной чувствительности по Прауснитцу — Кюстнеру. Мы изучали сравнительное содержание общего и аллергенспецифического IgE в сыворотках крови больных поллинозами, иеинфекционно-аллергической (атонической) и инфекционно-аллергической формами бронхиальной астмы. Представляло интерес сравнить изменения уровней специфического IgE в процессе гипосенсибилизирующей терапии больных. Определение антител в динамике лечения позволит наряду с оценкой клинического эффекта лечения проводить иммунологический контроль эффективности лечения,

В этой работе были использованы контрольно-измерительные тесты IgE-Tеst для определения общего IgE и Phadebas RAST для определения аллергенспецифического IgE шведской фирмы Фармация,

Обследовано 4 группы больных аллергией (100 человек) с положительными диагностическими кожными пробами. Первая группа (40 человек) включала больных с повышенной чувствительностью к пыльце злаковых трав (тимофеевка, овсяница, ежа). Количество общего IgE у них составляло в среднем 671 ±81,5 с колебаниями 220—2400 нг/мл (табл. 35). Методом PACT выявлены антитела к аллергену из пыльцы тимофеевки у 38 больных. Интенсивность реакций PACT совпадала с диагностическими кожными тестами. Корреляция между этими тестами составляла 95%.

В группе здоровых лиц (23) уровень IgE колеблется от 38 до 250 нг/мл, составляя в среднем 94,1 ±8,8 нг/мл.

Вторая группа (20 человек) состояла из больных поллинозами с чувствительностью к пыльце деревьев (ольха, орешник, береза). Уровень общего IgE равнялся в среднем 256±61,0 нг/мл с отклонениями 60— 840 нг/мл. Методом PACT выявлены антитела к аллергену березы в 80% Случаев. Интенсивность реакций PACT оценивали в этой группе в основном, на 2 плюса, тогда как кожные пробы —+++ или + + + +. Величину реакции PACT подтверждал низкий уровень общего IgE. Как показали результаты, для данной группы больных, с чувствительностью к пыльце деревьев более характерным является наличие клеточно-фикси-рованных антител (табл. 36).

Третья группа (20 человек) состояла из больных неинфекционно-аллергической формой бронхиальной астмы, вызванной аллергией к домашней пыли. Содержание общего IgE в этой группе больных было значительно выше, чем у больных поллинозами, и составляло в среднем 1140 ±278,3 нг/мл с отклонениями 250—5000 нг/мл. Однако величина реакций PACT на домашнюю пыль была невысокой- +, ++. Результаты этой реакции совпадали с кожными пробами в 71% случаев. При исследовании этих сывороток с аллергеном из клещей рода Dermatophagoi-des pteronyssinus интенсивность реакций резко увеличилась и соответствовала + + + и + + + +. Корреляция с кожными пробами возросла до 81%. Как показали эти анализы, двое больных, имеющих отрицательную реакцию на домашнюю пыль, на аллерген из клещей дали положительную реакцию на ++. Только один больной с положительной реакцией на домашнюю пыль имел отрицательную реакцию на клещевой аллерген. Эти результаты дают основание полагать, что аллергия к домашней пыли обусловлена-воздействием белкового компонента клещей рода Dermatopha-goides, содержащихся в домашней пыли и обладающих высокой сенсибилизирующей активностью. G данным аллергеном интенсивность реакций PACT была пропорциональна уровню общего IgE. Эти результаты наглядно показали, что содержание общего IgE является отражением уровня ал лергенспецифического IgE, а следовательно, Показателем степени аллорги-зации больного (табл. 37). Четвертая группа (20 человек) состояла из

больных с иифекционно-аллергической формой бронхиальной астмы I и II стадии по классификации А. Д. Адо и П. К. Булатова. Больные не получа ли глюкокортикоидов. У них были отмечены резкоположительные внутри- кожные реакции замедленного типа с вакциной из Neisseria perflava, полученной при посеве секрета, Взятого при бронхоскопии из Нижних дыхательных путей больных бронхиальной астмой. Средний уровень общего IgE составил 172±6,3 нг/мл с колебаниями 10—600 нг/мл. У 10 больных содержание общего IgE было менее 100; нг/мл1, что соответствовало норме. В этой группе больных, кроме замедленной реакции на нейссериальный аллерген, была отмечена разной степени интенсивности немедленная волдырная реакция, которая указывала на наличие реагинов., Сравнение результатов кожных проб с величиной общего IgE выявило соответствие между повышенным содержанием сывороточного IgE и наличием поло жительной кожной реакции немедленного типа. Возможно, в пато генезе бронхиальной астмы у некоторых больных могут играть роль реагины.

Таким образом, полученные данные показали, что при атонической форме бронхиальной астмы содержание общего IgE в сыворотках крови больных в 7 раз выше, чем при инфекционно-аллергической форме.

У 24 больных с аллергией к пыльце злаковых трав определяли антитела в процессе первого курса специфической гипосенсибилизации очищенным препаратом пролонгированного действия — цинтаналом ПТ-3, содержащим смесь пыльцы трех трав (табл. 38). Специфические антитела измеряли к наиболее сильному аллергену — тимофеевке и реакцию оценивали по величине связанной радиоактивности.

В среднем уровень IgE в сыворотках крови больных первого года лечения увеличивался к середине лечения на 18,9%, а затем к концу лечения снижался на 10,3% от исходного значения. У некоторых больных уровень антител к концу лечения поднимался выше первоначального значения. На втором году лечения больных не отмечалось пика подъема IgE. Уровень антител постепенно падал у всех больных и в конце лечения снижался в среднем по группе на 27% от исходного значения IgE второго года лечения. Снижение IgE крови больных после проведения курса гипосенсибилизации соответствовало последующему клиническому улучшению в период цветения трав. Очевидно, что иммунологический механизм успешной специфической гипосенсибилизации определяется не только образованием защитных блокирующих антител, но и снижением уровня реагинов.