Аллергические болезни     |     Стандартизация экстрактов аллергенов

Иммунологические методы

К настоящему времени разработаны иммунологические методы идентификации и количественного анализа аэроаллергенов. В будущем комплекс этих методов должен заменить существующие физические способы подсчёта. Иммунологические методы не зависят от морфологических особенностей исследуемого материала и сводятся к определению способности собранного с фильтров элюата взаимодействовать с IgE- или IgG-AT человека [15] или мышиными моноклональ-ными AT [16]. В клинике Мауо проведены исследования с использованием сборника частиц большого объёма, который улавливал на стекловолоконный фильтр 95% частиц размером более 0,3 мкм. Элюированную с фильтра смесь аллергенов диализовали и подвергали лиофильной сушке, а затем исследовали с помощью теста ингибиции PACT на специфическую аллергенную активность или с помощью IgG-AT для выявления аллергенов, вызывающих экзогенный аллергический альвеолит. Метод показал высокую чувствительность: элюат, содержание аллергена в котором было эквивалентно 0,1 мг пыльцы, угнетал PACT с аллергеном амброзии на 40-50% [17], а также вызывал положительные реакции при постановке кожных проб [6]. Содержание аллергенов, выявляемых иммунологическим методом, коррелировало с количеством пыльцы и спор грибов, выявляемым традиционно используемыми методами, а также с выраженностью вызываемых ими симптомов у сенсибилизированных больных. Применение этого метода показало, что аллергенными свойствами обладают не только цельные пыльцевые зёрна амброзии, но и их детрит, причём эта активность сохранялась и после сезона цветения растений. Кроме того, выявлена значительная аллергенная активность частиц диаметром менее 1 мкм [18]. Использование малообъёмных воздухозаборников и получение моноклональ-ных AT к аллергену Fel d 1 позволили провести точные исследования уровня аллергенов кошки в воздухе [16]. Оказалось, что наибольшие количества аллергена Fel d 1 содержатся в частицах размером не более 2,5 мкм. Во время уборки в воздухе квартиры возникают концентрации, сопоставимые с создаваемыми небулай-зером при проведении провокационного ингаляционного теста (40 нг/м3). Небольшие размеры частиц способствуют тому, что аллергены Fel d 1 сохраняются в воздухе в течение длительного времени. В отличие от них, главный аллерген клещей домашней пыли Derp 1 ассоциируется с частицами диаметром 10 мкм [19] и более, в связи с чем во взвешенном состоянии в воздухе этот аллерген остаётся лишь непродолжительное время после уборки. Большинство пыльцевых зёрен при световой микроскопии трудно идентифицировать морфологически. Иммунохимические методы разрешают и эту проблему. Для этого пыльцу, собранную в ловушку, наносят на нитроцеллюлозу, затем проводят идентификацию зёрен в люминесцентном микроскопе с применением сандвич-метода, используя специфические AT к пыльце и меченные флюоресцеином анти-АТ. Метод весьма многообещающ, так как позволяет измерять аллергенный материал, реагирующий с человеческими IgE-AT. В настоящее время выпускают коммерческие наборы для количественного определения главного аллергена клещей домашней пыли Der р 1и Der f 1 и главного аллергена кошки Fel d 1 (ALK America, Milford, CT).